Analyse amelioree des mutations du gene nf1

Improved mutation analysis of the nf1 gene

Abstract

The present invention relates to a method for mutation analysis of the neurofibromatosis 1 (NF1) gene of a patient comprising the steps of extracting DNA from peripheral blood lymphocytes of said patient, establishing an EBV transformed B-lymphoblastoid cell line using lymphocytes from said patient, treatment of said EBV transformed B-lymphoblastoid cell line culture with puromycin, immediate extracting RNA of cultures of said cell line, amplifying said RNA using suitable primers, and, obtaining peptide fragments by means of in vitro transcription/translation of said amplified fragments. This new approach allows a much faster, sensitive and reliable analysis of any NF1 mutation that is normally difficult to perform due to unstable and wrong-spliced transcripts. Using this technique, mutations within the NF1 gene can be detected in 83% of all cases, which is significantly higher compared to previously described analysis techniques (71%), and do not result in false positives which are expectable from other setups. This invention also relates to the identification of new hotspots and specific NF1 mutations. This invention comprises diagnostic kits for the detection of described specific mutations and hotspot domains, compounds correcting the structure of specific mutated NF1 proteins and in vitro and in vivo systems that can be used to screen for these therapeutic compounds.
La présente invention concerne un procédé d'analyse améliorée des mutations du gène NF1 (neurofibromatose) chez un patient, qui consiste à extraire des ADN à partir des leucocytes du sang périphérique du patient, à établir une lignée cellulaire B-lymphoblastoïde transformée par EBV en utilisant des leucocytes dudit patient, à traiter cette culture de lignée cellulaire B-lymphoblastoïde transformée par EBV avec de la puromycine, à extraire directement l'ARN des cultures de ladite lignée cellulaire, à amplifier cet ARN au moyen d'amorces appropriées et à obtenir des fragments de peptides au moyen de transcription/traduction in vitro desdits fragments amplifiés. Cette nouvelle technique permet une analyse beaucoup plus rapide, sensible et fiable de n'importe quelle mutation de NF1, qui est normalement difficile à effectuer en raison de transcrits instables et à épissage incorrect. En utilisant cette technique, on peut détecter les mutations dans le gène NF1 dans 83 % des cas, ce qui représente une amélioration importante par rapport aux techniques existantes (71%) et n'entraîne pas de résultats positifs incorrects, ce qui peut arriver à d'autres configurations d'analyse. L'invention se rapporte également à l'identification de nouveaux domaines sensibles et de mutations spécifiques de NF1. L'invention comprend des kits diagnostiques destinés à la détection des mutations spécifiques décrites et des domaines sensibles, des composés corrigeant la structure des mutations de protéines NF1 spécifiques et des systèmes in vitro et in vivo pouvant s'utiliser pour effectuer des criblages à la recherche de ces composés thérapeutiques.

Claims

Description

Topics

Download Full PDF Version (Non-Commercial Use)

Patent Citations (1)

    Publication numberPublication dateAssigneeTitle
    US-5605799-AFebruary 25, 1997University Of Utah Research FoundationSomatic mutations in neurofibromatosis type 1 gene in human tumors

NO-Patent Citations (5)

    Title
    BAHUAU M. ET AL.,: "novel recurrent nonsense mutation causing neurofibromatosis type 1 NF1 in a family segragating both NF1 and noonan syndrome", AM.J. OF MEDICCAL GENETICS, vol. 75, - 23 January 1998 (1998-01-23), pages 265 - 272, XP000901143
    HOFFMEYER S. ET AL.,: "on unequal allelic expression of the neurofibromin gene in neurofibromatosis type 1", HUMAN MOLECULAR GENETICS, vol. 4, no. 8, - 1995, pages 1267 - 1272, XP002134962
    MESSIAEN L.M. ET AL.,: "Identification of 9 different NF1 mutations in 13 unrelated Belgian patients using the combined approach of the protein truncation assay and heteroduplex analysis", AMERICAN JOURNAL OF HUMAN GENETICS, vol. 61, no. 4, - October 1997 (1997-10-01), pages 404, XP000901227
    PARK V. M. & PIVNICK E.: "neurofibromatosis type 1 (NF1): a protein truncation assay yielding identification of mutations in 73% of patients", J. MED. GENET, vol. 35, - October 1998 (1998-10-01), pages 813 - 820, XP000901147
    SPECK S.H. ET AL.,: "an epstein-barr virus transcript from a latently infected, growth-transformed B-cell line encodes a highly repetitive polypeptide", PROC. NATL. ACAD. SCI. USA, vol. 83, - December 1986 (1986-12-01), pages 9298 - 9302, XP002134961

Cited By (0)

    Publication numberPublication dateAssigneeTitle